化粧品に配合されている成分、コウジ酸の効果や安全性について調べている方へ

培養したマウスメラノーマB16細胞から抽出したチロシナーゼおよびドーパを基質として0.5,1.0および2.0μmol/mLのコウジ酸を添加し、2分ごとに測定したところ、以下のグラフのように、

B16細胞から分離した分画のチロシナーゼ活性は、添加コウジ酸の濃度に依存的に抑制された。

次に、健常な77人（男性31人、女性46人）のボランティアの右腕内側2箇所に紫外線ランプ（0.88J/c㎡）を1日1回3日間連続で照射した。

各照射部位の1箇所に1%コウジ酸配合クリームを、他方にコウジ酸未配合クリームをそれぞれ1日3回（朝・夕・夜）塗布し、色素沈着度を肉眼的に5段階（0:なし、1:軽微、2:軽度、3:中程度、4:高度）で1週間ごとに評価し、また両塗布部位の色素沈着度を比較した差を4段階（1:著明な差、2:明らかな差、3:わずかな差、4:不変）で判定した。

その結果、コウジ酸クリームの有効率は男性90.3%、女性75.5%で明らかな色素沈着抑制作用を示した。

さらに、臨床試験として1985-1988年の間に神戸大学附属病院皮膚科を受診し、コウジ酸クリームを2ヶ月以上外用した103人ならびに1992-1993年の間に神戸海星病院皮膚科を受診し、コウジ酸クリームを2ヶ月以上外用した111人の色素異常症の患者に、1%および2.5%コウジ酸配合クリームを1日2回（朝・就寝前）、まず左側のみ単純塗布してもらい、効果を自覚的ならびに他覚的に認めた時点で両側に塗布してもらった。

1ヶ月に1回の割合で来院してもらい、その際に初診時と比較して色素沈着の改善度を観察し、5段階（著効、有効、やや有効、無効、悪化）に分けて医師が判定したところ、204人のうち著効11.8%、有効33.8%、やや有効28.4%で合計74.0%に何らかの改善が認められ、悪化は認められなかった。

効果発現はまでの期間は、改善のみられた症例の90%以上で4ヶ月いないに効果が生じ、1%濃度群と2.5%濃度群で濃度による差はみられなかった。

疾患別に有効度の高いものから順次列挙すると、肝斑、炎症後色素沈着、日光性および老人性黒子、雀卵斑となった。

副作用は、軽微な発赤・掻痒が合計8人（3.9%）にみられ、これらの患者は中途中止した。

症状の軽快後に2人の患者にパッチテストを実施したが、陰性であった。

ドーパクロムを基質とし、各用量のコウジ酸を添加した後に培養・処理したB16細胞から抽出したTRP-2粗酵素液を加えて培養した後にDHICA量およびTRP-2阻害率を測定したところ、以下の表のように、

コウジ酸濃度 （μg/mL）	細胞数 （×10⁶）	DHICA産生量 （×10⁴ area）	TRP-2阻害率 （%）
0	3.0 ± 0.4	8.6 ± 2.9	–
50	2.8 ± 0.4	7.9 ± 2.8	7.7 ± 2.0
100	2.7 ± 0.8	7.2 ± 3.0	18.4 ± 6.4
200	2.5 ± 0.7	6.7 ± 2.4	21.9 ± 3.1

コウジ酸は、50-200μg/mLの添加濃度においてわずかな細胞増殖の抑制は認められたものの、7.7%-21.9%のTRP-2活性抑制効果を示した。

タンパク質と糖の非酵素的反応を阻害知る成分としては、アミノグアニジンがよく知られているが、アミノグアニジンは効果の面で優れているものの、安全性に問題があり実用化には至っていない。

コウジ酸には、AGEs産生抑制作用がある程度は認められるものの、単独使用では黄ぐすみの効果を期待するのに3.0%以上の高配合が必須であり、安全性や製剤への着色を考慮した場合に、コウジ酸単独使用では十分なAGEs産生抑制作用を発揮させることは難しい。

そこで、コウジ酸の吸収性を高める作用、コウジ酸との併用によって実用的なAGEs産生抑制効果が得られることおよびコウジ酸の着色抑制効果がある成分を探索した。

陽性対照として0.2mMアミノグアニジンを用いて、各濃度のコウジ酸と各濃度のハマナス花エキス、ユキノシタエキスおよびオリーブ葉エキスを併用し、AGEs産生抑制効果を測定したところ、以下の表のように、

主成分	主成分濃度 （%）	併用成分濃度（%）
		ハマナス花エキス			ユキノシタエキス			オリーブ葉エキス
		0	0.05	0.1	0	0.05	0.1	0	0.05	0.1
0.2mMアミノグアニジン		49.6	55.6	61.2	49.6	52.5	55.9	49.6	47.3	45.0
コウジ酸	0	–	13.6	45.9	–	6.8	27.5	–	8.4	33.0
	0.001	0.3	19.0	53.1	0.3	6.6	28.0	0.3	5.9	29.3
	0.002	27.3	50.1	78.1	27.3	29.6	36.5	27.3	22.2	24.7
	0.003	39.8	65.8	93.7	39.8	40.1	42.1	39.8	36.1	38.3
	0.004	46.2	74.2	96.3	46.2	47.7	48.1	46.2	40.5	42.8
	0.005	55.9	83.6	98.6	55.9	43.3	49.3	55.9	41.1	40.6

コウジ酸とハマナス花エキスを併用することでAGEs産生抑制作用の相乗効果が認められた。

また別の試験により、ハマナス花エキスにはコウジ酸の吸収を促進する作用およびコウジ酸の経時的着色を抑制する作用が認められた。

Cosmetic Ingredient Reviewの安全性データ（文献1:2010）によると、

• [ヒト試験] 54人の被検者に1%コウジ酸を含むクリーム製品を対象にHRIPT（皮膚累積刺激&感作試験）を閉塞パッチで実施したところ、いずれの期間においても皮膚反応は観察されなかった（Consumer Product Testing Co,2006）
• [ヒト試験] 218人の被検者に2%コウジ酸を含む製剤0.2mgを対象にHRIPT（皮膚累積刺激&感作試験）を半閉塞パッチで実施したところ、誘導期間において11回の最小限または疑わしい反応および4回の明瞭な紅斑反応が観察された。48時間で最小または疑わしい反応は1つだけしか観察されなかったが、それも72時間で消失した。2%コウジ酸を含む製剤に感作の兆候はなかったと結論づけられた
• [ヒト試験] 肝斑の治療においてコウジ酸は通常1%濃度の調製物を1日2回の頻度で2ヶ月間にわたって使用されますが、この治療の副作用として接触性アレルギーがあると記載されている（Prignano F, et al,2007）

Scientific Committee on Consumer Productsの安全性データ（文献2:2008）によると、

• [ヒト試験] 1%までのコウジ酸配合フェイスケアおよびハンドケア製品は安全である

河合皮膚医学研究所の安全性データ（文献1:2010）によると、

• [ヒト試験] 接触皮膚炎の疑いのある220人の患者においてコウジ酸配合スキンケア製品を使用していた8人のうち5人はコウジ酸に陽性反応を示した。またコウジ酸配合製品を使用していない残りの212人にコウジ酸を対象としたパッチテストを実施したところ、例外なく陰性であった

と記載されています。

Cosmetic Ingredient Reviewの安全性データ（文献1:2010）によると、

• [動物試験] 5匹のウサギの片眼に3%コウジ酸水溶液0.05mLを点眼し、眼はすすがず、点眼30分および1,6,24,48および72時間後および7日後に眼を検査したところ、30分後で1匹のウサギにわずかな発赤が観察されたが、ほかはいずれの時間でも影響は観察されなかった。この試験の正確さを判断するために同じ試験物質を4匹のウサギに同様の試験を実施したところ、2匹のウサギに一過性の軽度の充血が観察されたが、ほかの影響は観察されなかった。別の補足的試験において9匹のウサギに3%コウジ酸溶液で同様の試験を実施したところ、72時間までの検査で特異な反応または炎症反応は観察されなかった

と記載されています。

Cosmetic Ingredient Reviewの安全性データ（文献1:2010）によると、

• [動物試験] 10匹のモルモットの背中側胸部皮膚2箇所に5%コウジ酸水溶液0.5mLを1つは閉塞適用し、もう片方は解放適用し、15cmの距離で30分間UVライトを照射した後にパッチを除去し、両方の部位を評価するという手順を5日間連続で毎日繰り返したところ、閉塞パッチ部位では皮膚反応は観察されなかったが、解放パッチ部位で1,2および3日目に3匹のモルモットでそれぞれ独立したわずかな紅斑が観察された。コウジ酸はモルモットにおける紫外線照射後にわずかな皮膚反応を引き起こす可能性があると結論付けられた（Elliott P H,1978）
• [動物試験] 10匹の剃毛したモルモットの背頸部に5%コウジ酸を含むアルコール0.2mLを5日間連続で適用し、背部中部に対照としてアルコール0.2mLを毎日適用した。各適用後に15cmの距離でUVライトを15分間照射した。10日間の休息期間の後に頚部領域に1%コウジ酸を含むアルコールをチャレンジ適用し、部位を15分間UVライトで照射し、1,24,48および72時間で紅斑の有無を観察したところ、1および2回目の誘導期間の照射では皮膚反応は観察されなかったが、3,4および5回目の照射で10匹のうち8匹に軽度の紅斑が観察された。チャレンジ期間では皮膚反応は観察されなかったため、この試験ではコウジ酸が遅延接触性光感作性を誘発しなかったと結論づけた（Elliott P H,1978）
• [動物試験] 10匹のモルモット3グループの背中側胸部に1%コウジ酸を含むクリーム0.25gと3%コウジ酸を含むクリーム0.25gおよび陽性対照として白色ワセリンを含むアントラセン軟膏を適用し、部位の半分に10cmの距離でブラックライトを38分間照射し、照射24時間後に反応を評価した。この手順を5日間毎日繰り返したところ、1%および3%コウジ酸を含むクリームは照射後に皮膚反応は観察されなかったため、コウジ酸は光毒性ではないと結論づけられた（Sato K, et al,1982）

と記載されています。

– 遺伝毒性について –

in vitro試験では枯草菌DNA傷害性、サルモネラ菌突然変異原性、染色体異常誘発性、小核誘発性が一部の試験でみられ、遺伝毒性も認められた。

しかし、その活性は弱く、高用量でのみ認められた。

in vivo試験では、肝臓を用いた小核試験においてはマウスで陽性であったが、ラットでは陰性、骨髄および末梢血を用いた小核試験ではラットで陽性の報告があるが、マウスでは陰性の結果であった。

また、認められた陽性結果は、いずれも高用量で認められるものであった。

トランスジェニクマウスを用いた28日間混餌投与による導入遺伝子突然変異試験で、 DNA酸化的傷害の指標が上昇したとの報告があるが、同一個体から採取した肝細胞における遺伝子突然変異誘発性は認められていない。

皮膚への影響については、3%コウジ酸の皮膚塗布によるマウス皮膚小核試験では、光照射の有無に関わらず陰性であった。

また、コウジ酸の DNA付加体形成試験では、マウスおよびラットともに肝臓においてDNA付加体Aの形成は、試験された条件下においては認められていない。

– 発がん性について –

発がん性については、マウスの20ヶ月反復投与試験において、甲状腺・下垂体ホルモンのネガティブフィー ドバックを介したと考えられる甲状腺腫瘍のほか、肝腫瘍の増加が認められている。

また、雄ラットの55週間反復投与試験において、甲状腺腫瘍とともに、肝細胞障害及び前がん病変の増加が認められた。

マウスにおいても、ラットにおいても肝臓への影響は高い用量（1-3%混餌投与）でみられた知見である。

今回報告された混餌投与によるラット肝イニシエーション試験では、高用量2%において弱いイニシエーション作用を示唆する結果が認められたが、試験デザイン等の問題も指摘され、コウジ酸の肝イニシエーション作用を明確に証明するものではないと考えられる。

また、今回報告されたマウス中期2段階発がん試験で肝イニシエーション活性は認められず、3%コウジ酸を含むクリームをマウス背中に塗布して行った皮膚2段階発がん試験では、イニシエーション活性もプロモーション活性も認められなかった。

– 経皮吸収等について –

コウジ酸を1%含むクリームを健常人の女性6人の顔面に1日500mg塗布したヒト経皮吸収試験では、血漿中濃度（定量限界1ng/mL）は塗布後3-6時間で最高値を示し、6人の被験者で最高血漿中濃度の平均値は1.54ng/mLであり、コウジ酸の皮膚から体内 1.54 ng/mL （血中）への吸収はほとんどないものと考えられる。

また、ヒトにおける10年以上の使用経験から影響はないものと考えられ、これまで健康被害の報告もない。